近年来，随着细胞与基因治疗在肿瘤攻克上表现出显著疗效，特别是围绕T细胞展开的CAR-T、TCR-T、TIL等疗法发挥出了优良的肿瘤杀伤效果，因此T细胞疗法市场迎来了大幅的增长趋势。T细胞体外扩增与激活是核心环节，而CD3/CD28抗体偶联磁珠凭借其高效性和稳定性，成为行业主流选择。
T细胞激活通路——双信号机制
01 第一信号：抗原特异性信号
T细胞受体（TCR/CD3）识别抗原呈递细胞（APC）表面的MHC-抗原肽复合物，触发下游信号传导（如钙调蛋白、MAPK、NF-κB通路），启动T细胞活化。
02 第二信号：共刺激信号
APC表面的CD80/CD86与T细胞CD28结合，增强TCR信号，促进IL-2分泌和抗凋亡蛋白Bcl-xL表达，防止T细胞失能。
T细胞活化增殖信号通路图[1]
磁珠激活法原理与优势
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双信号同步提供：通过将抗CD3和抗CD28抗体偶联至磁珠表面，同时提供T细胞活化的第一信号和第二信号，模拟天然抗原呈递细胞（APC）的双信号激活模式 -
促进免疫突触形成：磁珠的直径一般与APC大小相近，能促进T细胞与磁珠形成类似免疫突触的结构，增强信号传导效率 -
动态接触：磁珠可自由移动，与T细胞表面受体动态结合，避免固定化抗体因空间位阻导致的信号弱化
近岸蛋白为CGT客户提供GMP级CD3/CD28 beads(Cat.No.:GMP-B016)，选用直径为 4.5μm的无孔单分散超顺磁性微珠，易于磁化和退磁，操作简便易去除，确保无磁残留风险；本产品采用人源化抗体原料，为人源化的 anti-CD28抗体，以及OKT3经人源化改造而成的Anti-CD3抗体，且均经过细胞库检定和病毒清除验证，极大降低免疫原性，提高T细胞疗法临床应用安全性。
产品优势
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14天扩增倍数达1000倍以上
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4.5μm超顺磁性微珠，操作简便易去除，无磁残留风险
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偶联的抗体为人源化抗体，更低的免疫原性，均经过细胞库检定和病毒清除验证
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低内毒素，小于0.5 EU/mL
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GMP级别，高批间一致性
数据展示
14天扩增倍数可达1000倍以上，高于国内外同类市场产品
Expansion of the human PBMCs. Cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016) , and expanded for 14 days.
激活第5天，细胞活化增殖占比99%以上
The human PBMCs were labeled with CFSE and stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016), and then the proliferation of cells was assessed with CFSE dilution assay by flow Cytometry on day 5 after stimulation.
激活后T细胞耗竭程度低，在 PD-1 低表达情况下可扩增 8 天
PD-1 expression of the activated human T Cells. The human T cells were stimulated with Anti- Human CD3/CD28 Beads (Cat.No.:GMP-B016), and expanded for 14 days.
使用建议
（1）（可选）磁珠清洗：磁珠重悬后，取适量的磁珠到新的无菌 EP 管中，加入 1mL PBS (pH7.4)重悬，混合 3-5min，置于磁力架上分离磁珠 1min，去掉上清，加细胞培养基重悬待用；
（2）细胞激活：将洗好的磁珠加入到已分离的 PBMC 或T细胞中，重悬到1-2×106/mL确保按照说明书推荐用量添加磁珠（见磁珠推荐使用表），置于 37℃，5%CO2培养箱培养，并添加 rhIL-2（Cat.No:GMP-C013）*或rhIL-7（Cat.No:GMP-C086） + rhIL-15（Cat.No:GMP-C016）扩增；
*单独添加IL-2，建议使用浓度为100ng/mL，可根据实际反应体系进行调整及优化。
（3）细胞扩增：细胞密度超过 2.5×106/mL 或者培养基变黄时，将细胞转移到更大的培养器皿中并用新的含有IL-2或IL-7+IL-15的培养基稀释到0.5-1×106/mL，并记录细胞活率及扩增倍数，培养 14-21 天后收集细胞。
磁珠Q&A
Q1: GMP-B016只能激活T细胞吗，能否直接激活PBMC？
A1: 可以直接激活PBMC，并且激活14天后T细胞的占比达到95%以上。
Q2：磁珠是否具备分选功能？
A2：不具备分选功能
Q3：磁珠是否会影响流式检测？
A3：首先，磁珠原材料采用超顺磁颗粒，在非磁场条件包括流式检测条件下不具备磁性不会堵塞流式机器液路；其次，磁珠尺寸均一为4.5um，低于白细胞大小，在流式前侧向分布能够和细胞显著区分。
Q4：激活前后细胞形态变化？
A4：细胞活化除了通过活化表型检测，在细胞形态上也会有显著变化，激活后的T细胞尺寸变大，发生抱团，未抱团的细胞也会变成近水滴状。
Q5：磁珠如何去除，如何判断残留？
A5：将细胞磁珠混合液置于离心管中并放在磁力架上静置1min，保持离心管在磁力架，用移液枪吸出细胞悬液。磁珠和细胞在显微镜下可显著区分，亦可在流式机器上区分。
方法一：显微镜观察
方法二：流式检测
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相关产品信息
| Cat.No. | Product Name |
| GMP-B016 | anti-Human CD3/CD28 Beads |
| GMP-A018 | Recombinant anti-Human CD3 mAb |
| GMP-A063 | Recombinant anti-Human CD28 mAb |
| GMP-C013 | Recombinant Human IL-2,DMF Filed |
| GMP-CD66 | Recombinant Human IL-2 |
| GMP-CD47 | Recombinant Human IL-7,DMF Filed |
| GMP-C086 | Recombinant Human IL-7 |
| GMP-C016 | Recombinant Human IL-15,DMF Filed |
参考文献
[1] Demkes, Evelyne J et al. “Requirements for Proper Immunosuppressive Regimens to Limit Translational Failure of Cardiac Cell Therapy in Preclinical Large Animal Models.” Journal of cardiovascular translational research vol. 14,1 (2021): 88-99. doi:10.1007/s12265-020-10035-2